分光光度计的原理和使用方法?
分光光度计介绍:
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。该仪器是食品厂、饮用水厂办理QS、HACCP认证的必备检验设备。
分光光度计原理:
分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光线透过测试的样品后,部分光线被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
分光光度计组成:主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。
分光光度定义:
分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析。
常用的波长范围:
(1)200~400nm的紫外光区
(2)400~760nm的可见光区
(3)2.5~25μm(按波数计为4000cm<-1>~400cm<-1>)的X光区
所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计)、X分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度,所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定,定期进行校正检定。
分光光度计的重要配件—— 比色杯
比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根据不同的测量体积,有比色杯和毛细比色杯等。一般测试核酸和紫外定量蛋白,均采用石英杯或者玻璃杯,但是不适合比色法测定。因为反应中的染料(如考马斯亮兰)能让石英和玻璃着色,所以必须采用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不适合用于在紫外范围内测试样品。
分光光度计操作方法:
1.接通电源,打开仪器开关,掀开样品室暗箱盖,预热10分钟。
2.将灵敏度开关调至“1”档(若零点调节器调不到“0”时,需选用较)。
3.根据所需波长转动波长选择钮。
4.将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处,用擦镜纸擦清外壁,放入样品室内,使空白管对准光路。
5.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器,使读数盘指针指向t=0处。
6.盖上暗箱盖,调节“100”调节器,使空白管的t=100,指针稳定后逐步拉出样品滑竿,分别读出测定管的光密度值,并记录。
7.比色完毕,关上电源,取出比色皿洗净,样品室用软布或软纸擦净。
分光光度计注意事项:
1.该仪器应放在干燥的房间内,使用时放置在坚固平稳的工作台上,室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风,防止灯泡灯丝发亮不稳定。
2.使用本仪器前,使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理,以及各个操纵旋钮之功能。在未按通电源之前,应该对仪器的安全性能进行检查,电源接线应牢固,通电也要良好,各个调节旋钮的起始位置应该正确,然后再按通电源开关。
3.在仪器尚未接通电源时,电表指针必须于“0”刻线上,若不是这种情况,则可以用电表上的校正螺丝进行调节。
分光光度计的原理是什么
分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射下,产生了对光吸收的效应,物质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱,因此当某单色光通过溶液时,其能量就会被吸收而减弱,光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系,也即符合比色原理:比耳定律。分光光度计,又称光谱仪,是将成分复杂的光,分解为光谱线的科学仪器。测量范围一般包括可见光区和紫外光区。
分光光度计原理
1、原理:利用一定频率的紫外—可见光照射分析物,它将有选择的被吸收。吸收光谱可以反映出特征。
2、结构组成:光源、单色器、样品池、检测器。单光束分光光度计的,双光束分光光度计组成。
2、光源:提供连续的辐射。单色器是分光光度计的心脏部分,是把来自光源的混合光分解成单色光,并能随意改变波长。
分光光度计结构与原理
分光光度计的基本构成是用一个分光器件(棱镜、镜子)把一个光源的光分成两路(确保两个光的波长一致)分别照射在相同的透光容器中的样品(被测)和基准(标准,已知浓度、成分)溶液,然后对比穿过后的光线(对比样品和基准的颜色),即可对样品和基准的一致性做出定性判断(如:是否达标)。通过样品与多个基准的对比可以对样品做出定量分析。
选择可见和紫外可见的分光光度计所关注的关键的指标有X:一是波长范围,二是波长准确度,三是杂散光参数。波长范围的选择是由用户实验需要所定,波长范围越宽的价格越贵;波长准确度及杂散光参数的数值越低,表示性能越好。
应用领域:冶金、地质环保、食品、医疗、化工、农林等行业的材料分析及质量控制部门进行常量、微量金属(半金属)元素分析的有力工具,是生产、教育、科研单位分析实验室的比备常规仪器之一。